Kun je het PCR-product sequencen?
Kun je het PCR-product sequencen?

Video: Kun je het PCR-product sequencen?

Video: Kun je het PCR-product sequencen?
Video: МИНУСЫ ЖИЗНИ В ТУРЦИИ // Топ 7 минусов спустя 16 лет жизни в Турции // Мой опыт // Турция 2021 2024, November
Anonim

direct Volgorde aanbrengen in van PCR-producten . Het is heel goed mogelijk om direct volgorde een PCR-product zonder eerst het fragment te klonen. direct PCR-sequencing is zelden succesvol tenzij jij besteed er wat tijd aan om ervoor te zorgen dat jij vallen niet in een van de vele vallen.

Wat is sequencing PCR op deze manier?

direct Volgorde aanbrengen in van PCR Producten. Je moet alles verwijderen PCR primers en niet-opgenomen nucleotiden voordat het product is gesequenced . Volgorde aanbrengen in gebruikt slechts één primer in plaats van de twee die worden gebruikt in PCR . Als u niet beide primers verwijdert, krijgt u er twee sequenties over elkaar heen gelegd die niet leesbaar zijn.

Kan ik ook PCR-primers gebruiken voor sequencing? PCR-primers zijn bedoeld voor PCR versterking om een amplicon te verkrijgen. Sequentieprimers zijn gebruikt tot volgorde een DNA-fragment en onthullen zijn DNA volgorde identificeren. 4. Twee PCR-primers zijn nodig in een PCR reactie (meestal); maar een sequencing-primer wordt toegevoegd aan een volgorde aanbrengen in reactie.

Met dit in het achterhoofd, hoe test u PCR-producten?

Detectie en analyse van PCR-producten . De Product van een PCR moet een fragment of fragmenten van DNA van een bepaalde lengte zijn. Er kunnen veel technieken worden gebruikt om geamplificeerde sequenties te detecteren (zie tabel). De eenvoudigste en meest gebruikte techniek is elektroforese van de PCR-product op een agarosegel met EtBr (ethidiumbromide).

Waarom is het nodig om PCR-producten te zuiveren voordat ze worden gesequenced?

Zuivering van DNA van a PCR reactie is typisch: nodig voor downstream gebruik, en vergemakkelijkt de verwijdering van enzymen, nucleotiden, primers en buffercomponenten.

Aanbevolen: