Inhoudsopgave:

Hoe kies je klonen?
Hoe kies je klonen?

Video: Hoe kies je klonen?

Video: Hoe kies je klonen?
Video: Hoe kan je klonen in perspectief in Photoshop? 2024, November
Anonim

Wanneer kiezen een kloon , zorg ervoor dat de wortels sterk en wit zijn en gretig uit het groeimedium steken. Als de wortels bruin en verschrompeld zijn, of anderszins inactief lijken, leg ze dan terug en zoek naar een betere.

Trouwens, hoe kloon je een enkele cel?

  1. Tel de cellen om ~ 16.000 cellen in de eerste put (A1) van een 96-wells-plaat met 200 µL medium te plaatsen.
  2. Verwijder 100 L van A1 met cellen en meng met B1, 3x op en neer pipetteren om goed te mengen voordat u 100 µL verwijdert en mengt met C1, enz.

En hoe kies je een zoogdiercelkolonie? Plaats de plaat onder de microscoop om ongedifferentieerd gezond te selecteren kolonies . Kies kolonies met behulp van een P-20 pipet ingesteld op 10ul. Voorzichtig kiezen een kolonie zonder de. te breken kolonie in single cellen en breng het over in een plaat met 96 putjes met trypsine. Pipetteer een paar keer op en neer om de kolonie.

Dienovereenkomstig, hoe gebruik je een klooncilinder?

Gebruik makend van steriele middelgrote pincet, oppakken a klonen cilinder . Druk voorzichtig op de platte onderkant van de cilinder in het gladde siliconenvet en verwijder met een plotselinge verticale beweging. Als het goed wordt gedaan, zal dit een gelijkmatige verdeling van het vet op de bodem van de cilinder . Stel de cilinder boven een kolonie.

Hoe kies je kolonies voor stabiele cellijnen?

Het protocol voor het genereren van stabiele cellijnen vereist verschillende stappen, zoals hieronder weergegeven:

  1. Genereer een kill-curve om de optimale selectie antibioticumconcentratie te bepalen.
  2. Transfecteer cellen met de gewenste plasmideconstruct(en)
  3. Selecteer en breid stabiele polyklonale kolonies uit.
  4. Identificeer enkele klonen door beperkte verdunning en uitbreiding.

Aanbevolen: