Wat is het doel van het gebruik van ddNTP's?
Wat is het doel van het gebruik van ddNTP's?

Video: Wat is het doel van het gebruik van ddNTP's?

Video: Wat is het doel van het gebruik van ddNTP's?
Video: 7.1 Sanger Sequencing using Dideoxyribonucleic Acid Nucleotides (ddNTPs) 2024, November
Anonim

DdNTP verwijst naar Dideoxynucleotiden trifosfaten die worden gebruikt in de Sanger dideoxy-methode om DNA-strengen van verschillende lengtes te produceren voor DNA-sequencing. Dit resulteert in de beëindiging van het DNA-polymerisatieproces (of DNA-verlenging) omdat dit proces een 3'-OH-groep nodig heeft om door te gaan.

Waarom worden ddNTP's gebruikt bij sequencing?

Dideoxynucleotiden zijn ketenverlengende remmers van DNA-polymerase, gebruikt in de Sanger-methode voor DNA volgorde aanbrengen in . De dideoxyribonucleotiden hebben geen 3'-hydroxylgroep, dus er kan geen verdere ketenverlenging optreden als deze dideoxynucleotide eenmaal aan de keten zit. Dit kan leiden tot de beëindiging van het DNA volgorde.

Evenzo hechten ddNTP's aan dNTP's? Een of meer van de dNTP's zijn radioactief gelabeld om de replicatieproducten te visualiseren. Ten slotte krijgt elke buis een van de vier speciale nucleotiden genaamd dideoxynucleotiden ( ddNTP's ). Eenmaal opgenomen, kan DNA-polymerase de keten echter niet verder verlengen omdat het een 3'-OH nodig heeft om bijvoegen naar het volgende nucleotide.

Op dezelfde manier kan men zich afvragen, hoe stoppen ddNTP's een sequencing-reactie?

Indien aanwezig in kleine hoeveelheden in sequentiereacties , dideoxyribonucleosidetrifosfaten ( ddNTP's ) de. beëindigen sequentiereactie: op verschillende posities in de groeiende DNA-strengen. ddNTP's stoppen een sequentiereactie omdat ze: ervoor zorgen dat DNA-polymerase van de matrijsstreng valt. C.

Welke techniek met Dideoxynucleotiden zou kunnen worden gebruikt?

Sanger-sequencing is een methode van DNA-sequencing op basis van de selectieve incorporatie van ketenbeëindigende dideoxynucleotiden door DNA-polymerase tijdens in vitro DNA-replicatie. Ontwikkeld door Frederick Sanger en collega's in 1977, was het de meest gebruikte gebruikt volgorde aanbrengen in methode voor ongeveer 40 jaar.

Aanbevolen: