Wat gebeurt er als je te veel restrictie-enzym toevoegt?
Wat gebeurt er als je te veel restrictie-enzym toevoegt?

Video: Wat gebeurt er als je te veel restrictie-enzym toevoegt?

Video: Wat gebeurt er als je te veel restrictie-enzym toevoegt?
Video: restrictie enzymen 2024, November
Anonim

Er kan een onvolledige spijsvertering optreden wanneer te veel of te klein enzym is gebruikt. De aanwezigheid van verontreinigingen in de DNA-monster kan verbieden de enzymen , wat ook resulteert in een onvolledige spijsvertering. Sommige restrictie-enzymen vereisen cofactoren voor volledige activiteit.

Trouwens, waarom worden restrictie-enzymen als laatste toegevoegd?

De restrictie-enzym is meestal de laatste onderdeel toegevoegd op een reactie om ervoor te zorgen dat het niet wordt blootgesteld aan extreme omstandigheden. De geassembleerde reactie moet daarna worden gemengd enzym toevoeging. Meng alle oplossingen met restrictie-enzymen voorzichtig te vermijden enzym inactivering.

Bovendien, hoe kan de vertering van restrictie-enzymen worden verbeterd? Gebruik niet meer dan de aanbevolen enzym hoeveelheid (bijv. 10 eenheden van enzym per microgram DNA). Verminder de hoeveelheid enzym in de reactie, indien nodig. Vermijd langdurige incubatie van de spijsvertering reactie. Gebruik de aanbevolen reactiebuffer.

Weet ook, waarom zou een restrictie-enzym niet knippen?

De voorbereiding van te splitsen DNA zou moeten vrij zijn van verontreinigingen zoals fenol, chloroform, alcohol, EDTA, detergenten of overmatige zouten, die allemaal kunnen interfereren met restrictie-enzym werkzaamheid. Als een remmer (vaak zout, EDTA of fenol) aanwezig is, zal het controle-DNA niet geknipt na het mengen.

Waarom kan de hoeveelheid enzym steractiviteit veroorzaken?

Steractiviteit is de versoepeling of wijziging van de specificiteit van de beperking enzym gemedieerde splitsing van DNA dat kan optreden onder reactieomstandigheden die aanzienlijk verschillen van die optimaal zijn voor de enzym . Sterrenactiviteit kan gebeuren vanwege de aanwezigheid van Mg2+, als is gezien in HindIII, bijvoorbeeld.

Aanbevolen: