Inhoudsopgave:

Hoe plaats je een gen in een plasmide?
Hoe plaats je een gen in een plasmide?

Video: Hoe plaats je een gen in een plasmide?

Video: Hoe plaats je een gen in een plasmide?
Video: DNA cloning and recombinant DNA | Biomolecules | MCAT | Khan Academy 2024, November
Anonim

De basisstappen zijn:

  1. Snijd de open plasmide en "plakken" in de gen . Dit proces is afhankelijk van restrictie-enzymen (die DNA knippen) en DNA-ligase (die DNA verbindt).
  2. Invoegen de plasmide in bacteriën.
  3. Veel opgroeien plasmide -bacteriën dragen en ze gebruiken als "fabrieken" om het eiwit te maken.

Ook, hoe kan een gen in een plasmide GCSE worden ingevoegd?

het is ingevoegd in een plasmide met behulp van ligase-enzymen. de plasmide gaat naar binnen een bacteriële cel. de transgene bacterie reproduceert, wat resulteert in in miljoenen identieke bacteriën die humane insuline produceren.

Bovendien, hoe subkloneer je een gen? Basisstappen voor Subklonen Je maakt je insert vrij en zuivert van de oudervector, ligeert deze insert in een voorbereide bestemmingsvector, transformeert deze ligatiereactie in competente bacteriële cellen. Vervolgens screen je de getransformeerde cellen voor de insert.

Dit in overweging nemend, wat zijn de 4 stappen van genklonering?

In de klassieke restrictie-enzymdigestie- en ligatie-kloneringsprotocollen omvat het klonen van elk DNA-fragment in wezen vier stappen:

  • isolatie van het DNA van belang (of doel-DNA),
  • afbinding,
  • transfectie (of transformatie), en.
  • een screening/selectieprocedure.

Hoe amplificeer je een plasmide?

Experimentele procedure

  1. Voer PCR uit en zuiver het PCR-product: Voer PCR uit om uw insert-DNA te amplificeren.
  2. Verteer je DNA:
  3. Isoleer uw insert en vector door gelzuivering:
  4. Ligate uw insert in uw vector:
  5. transformatie:
  6. Isoleer het afgewerkte plasmide:
  7. Controleer uw plasmide door te sequensen:

Aanbevolen: